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如何做細胞亞結構染色?

蛋白在細胞中的定位與其功能密切相關,因此确定目标蛋白的定位很重要。高分辨率成像使得研究人員在研究細胞環境内蛋白時,可以定位并追蹤蛋白在細胞内的運動軌迹。為了得到準确的實驗結果,确定目标蛋白是否定位于我們預期的細胞器中十分重要。

1. 追蹤您的目标蛋白

有兩種不同的方法可用于确認蛋白在細胞中的定位:細胞器特異性的抗體和細胞器染料。細胞器染料(Abcam有Cytopainter系列染料)作為複染色可以幫助确定特異的蛋白或者您的靶标分子在細胞内的定位,而使用細胞器特異相關的蛋白抗體來進行成像,則有助于更好地理解靶标分子在細胞中的功能。

兩者的特點和優勢對比如下:

細胞器标志物抗體

特性 優勢
超過60個不同細胞器和結構的靶标 方便地找到适用于實驗的商業化抗體
現有最明亮的染色 Alexa Fluor®染料帶來更高靈敏度
多個宿主物種和克隆 RabMAb®幫助您輕松研究多個目标蛋白

Cytopainter 細胞器染料

特性 優勢
适用于活細胞及固定後的細胞 适用于您現有的實驗方案
适用于增殖與非增殖細胞 可用于大部分細胞或組織樣品
具有很強的光穩定性 光漂白最小,且可以實現長時間曝光

 

 

2. Cytopainter的最佳用途

  • 研究活細胞---現有的商業化抗體隻能用于經固定的細胞,因此不能用于活細胞的追蹤研究。大多數細胞器染料可以對活細胞與固定後細胞的細胞器進行準确染色。這一特性意味着它們可以與抗體一起進行共染色實驗。

  • 研究多個蛋白---使用抗體研究多個靶标,其數量受到熒光偶聯抗體的限制。細胞器染料則繞過了這一限制,因為它們是化合物,當實驗需要多個靶标時,可以根據抗體來選擇适用的細胞器染料。

  • 細胞形态學/靶标分布研究---在疾病模型和突變細胞中,目标蛋白的細胞定位可能發生改變,或者細胞器的形态可能被改變,隻要亞細胞結構完整,細胞器染料就能對其染色。

3. 亞細胞熒光染色試劑盒

目前Abcam可以提供很多用于細胞亞結構的Cytopainter熒光染色試劑盒,常用的一些細胞器染色試劑盒彙總如下:

希望信息以上這些對于您的研究有幫助。

 

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